分光光度計(jì)的工作原理

來源：閱讀：657 發(fā)布時(shí)間：2022-07-21 10:01:29

分光光度計(jì)的基本工作原理是利用物質(zhì)對某種波長的光具有選擇性吸收的特性建立起來的鑒別物質(zhì)或測定其含量的一項(xiàng)技術(shù)。物質(zhì)對光（對光的波長）的吸收具有選擇性，不同的物質(zhì)都有各自的吸收光帶，所以，當(dāng)光色散后的光譜通過某一溶液時(shí)，其中某些波長的光線就會被溶液吸收。

單色光輻射穿過被測物質(zhì)溶液時(shí)，被該物質(zhì)吸收的量與該物質(zhì)的濃度和液層的厚度（光路長度）成正比，即符合比爾定律。

T=l/lo lg (lo/l) =εcb

T為透過率，lo為入射光強(qiáng)度，1為透射光強(qiáng)度，A為消光值（吸光度），ε為吸收系數(shù)，b為溶液的光徑長度，c為溶液的濃度。從以上公式可以看出，當(dāng)入射光、吸收系數(shù)和溶液厚度一定時(shí)，透光率是根據(jù)溶液的濃度而變化的。

朗伯一比爾定律概念圖

分光光度計(jì)主要由光源、單色器、樣品室、檢測器、信號處理器和顯示與存儲系統(tǒng)組成。分光光度計(jì)采用一個(gè)可以產(chǎn)生多個(gè)波長的光源，通過系列分光裝置，從而產(chǎn)生特定波長的光源，光源透過測試的樣品后，部分光源被吸收，計(jì)算樣品的吸光值，從而轉(zhuǎn)化成樣品的濃度。樣品的吸光值與樣品的濃度成正比。

分光光度計(jì)結(jié)構(gòu)圖

常用的波長范圍為：（1）200--400nm的紫外光區(qū)，（2）400~760nm的可見光區(qū)，（3）2. 5~25μm(按波數(shù)計(jì)為4000cm<-1>~400cm<-1>)的紅外光區(qū)。所用儀器為紫外分光光度計(jì)、可見光分光光度計(jì)（或比色計(jì)）、紅外分光光度計(jì)或原子吸收分光光度計(jì)。為保證測量的精密度和準(zhǔn)確度，所有儀器應(yīng)按照國家計(jì)量檢定規(guī)程或本錄規(guī)定，定期進(jìn)行校正檢定。分光光度計(jì)已經(jīng)成為現(xiàn)代分子生物實(shí)驗(yàn)室常規(guī)儀器。常用于核酸，蛋白定量以及細(xì)菌生長濃度的定量。